骨髓间充质干细胞的分离培养和生物学性状

作者：赖平平; 韩春茂; 岑航辉; 王金福

来源：浙江医学, 2004, (05): 6-8.

DOI：10.3969/j.issn.1006-2785.2004.05.003

• 骨髓间充质干细胞
• 细胞分离
• 细胞培养

目的建立一种体外分离纯化和培养扩增人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells熏MSCs)的方法,并探讨其生物学特性,为MSCs的进一步应用研究提供数据。方法抽取人骨髓后用Percoll分离液经密度梯度离心法分离得到单个核细胞熏以105个细胞蛐cm2密度接种,培养液为含10%胎牛血清的L-DMEM。倒置相差显微镜及吉姆萨-瑞氏染色观察其形态,MTT法测其生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期及表面标记物。结果培养的MSCs12h后换液,有部分细胞贴壁生长熏4～5d可见有集落形成熏14～20d左右可达到80%～90%融合熏倒置相差显微镜及吉姆萨-瑞氏染色可见细胞形态为梭形、多角形及纺锤状等熏生长曲线图显示MSCs增殖活跃,流式细胞仪检测显示约有86%的细胞处于G0、G1期,表面标记物中CD14、CD34、VLA-1、CD45和HLA-DR阴性,而CD44、CD105和CD29阳性。结论成功地建立了一种分离培养人骨髓MSCs的方法熏获得的细胞形态多样、增殖稳定。

• 单位
  浙江大学医学院附属第二医院