魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备

作者：唐国亮; 张玉宝; 王若愚; 王亚军; 赵霞; 苏学思; 金卫杰

来源：浙江农业学报, 2022, 34(11): 2471-2481.

DOI：10.3969/j.issn.1004-1524.2022.11.16

• 当归
• 魔芋花叶病毒
• 外壳蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

采用小RNA测序技术对甘肃省榆中县疑似感染病毒病的当归[(Angelica sinensis（Oliv.）Diels]样品进行测序鉴定，发现样品中含有魔芋花叶病毒（Konjac mosaic virus,KoMV）,通过反转录PCR（RT-PCR）扩增KoMV衣壳蛋白（capsid protein, CP）的cp基因，克隆的KoMV cp基因连接原核表达载体pET-28a（+）,导入E.coli RosettaTM（DE3）诱导表达蛋白，在Ni-NTA重力柱层析作用下纯化CP融合蛋白，并以此作为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。序列分析表明：KoMV cp基因片段大小为840 bp,编码280个氨基酸的外壳蛋白；与GenBank已注册同源性较高的KoMV分离物相比，核苷酸序列相似性为85.58%～99.41%,氨基酸序列相似性为89.32%～99.29%;KoMV的病毒种群分布存在明显的区域性和寄主差异。SDS-PAGE显示，不同温度诱导下KoMV CP融合蛋白在E.coli RosettaTM（DE3）中均以包涵体的形式大量表达，融合蛋白分子量为36 ku。间接ELISA和Western blot检测结果显示，制备的多克隆抗体效价达到32 000,能够与感染KoMV的当归叶片和纯化蛋白特异性结合，具有良好的特异性。本研究成功制备了当归KoMV CP融合蛋白的多克隆抗体IgG,为开发KoMV的血清学检测技术及CP蛋白的功能研究奠定了基础。

• 单位
  中国科学院大学; 中国科学院西北生态环境资源研究院