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摘要
目的探讨核仁小分子RNA宿主基因5(small nucleolar RNA host gene, SNHG5)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)诱导的星形胶质细胞损伤的影响。方法 (1)体外培养星形胶质细胞, 采用先缺氧培养6 h, 再复氧培养18 h的方法建立H/R细胞模型, Lipofectamine? 2000脂质体法进行细胞lncRNA SNHG5转染, RT-qPCR检测H/R细胞及转染后lncRNA SNHG5的表达情况。(2)星形胶质细胞分为正常对照组、模型组、转染对照组(转染pcDNA-NC至细胞后, 再建H/R细胞模型)和转染组(转染pcDNA-lncRNA SNHG5至细胞后, 再建H/R细胞模型), 观察过表达lncRNA SNHG5对星形胶质细胞的影响。(3)将转染lncRNA SNHG5并进行H/R干预的星形胶质细胞分为转染+溶媒组(0.1%的DMSO孵育)和转染+抑制剂组(20 μmol/L的LY294002孵育), 观察PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对H/R星形胶质细胞的影响。(4)CCK-8检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞凋亡, Western blot检测细胞中增殖蛋白(Cyclin D1、Cyclin E)、凋亡蛋白(Caspase-3、Bax)和p-PI3K、p-AKT的表达, ELISA检测细胞培养上清液中炎性因子IL-1β和TNF-α水平, 比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。采用SPSS 22.0软件进行独立样本t检验和单因素方差分析, 进一步两两比较用LSD-t检验。结果 (1)RT-qPCR结果显示, 经H/R干预后, 星形胶质细胞中的lncRNA SNHG5水平较正常培养细胞低(t=33.28, P<0.05)。(2)lncRNA SNHG5过表达实验:模型组细胞增殖活性低于正常对照组[CCK-8 OD值:(0.64±0.02), (1.23±0.02), t=62.58, P<0.05], 模型组细胞增殖蛋白Cyclin D1、Cyclin E表达均低于正常对照组(t=33.54, 32.20, 均P<0.05);转染组细胞增殖活性高于转染对照组[CCK-8 OD值:(1.49±0.02), (0.65±0.03), t=69.89, P<0.05], 转染组细胞增殖蛋白Cyclin D1、Cyclin E表达均高于转染对照组(t=24.96, 28.46, 均P<0.05)。模型组细胞凋亡率高于对照组[流式细胞术结果:(25.33±1.13)%, (9.06±0.21)%, t=42.47, P<0.05], 凋亡蛋白Caspase-3和Bax表达也高于对照组(t=57.41, 41.60, 均P<0.05);转染组细胞凋亡率低于转染对照组[(16.56±0.60)%, (25.89±1.18)%, t=21.14, P<0.05], 凋亡蛋白Caspase-3和Bax表达也高于转染对照组(t=77.79, 58.34, 均P<0.05)。模型组细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达均低于对照组(t=56.35, 33.94, 均P<0.05), 转染组细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达均高于转染对照组(t=130.14, 76.37, 均P<0.05)。ELISA结果显示, 模型组IL-1β和TNF-α水平均高于对照组(t=58.04, 30.63, 均P<0.05), 转染组IL-1β和TNF-α水平均低于转染对照组(t=33.63, 39.01, 均P<0.05)。比色法结果显示, 模型组LDH和MDA水平均高于对照组(t=65.51, 41.85, 均P<0.05), SOD水平低于对照组(t=48.82, P<0.05);转染组LDH和MDA水平均低于转染对照组(t=37.93, 30.72, 均P<0.05), SOD水平高于转染对照组(t=30.32, P<0.05)。(3)PI3K/Akt信号通路抑制实验:转染+抑制剂组的细胞增殖活性低于转染+溶媒组[CCK-8 OD值:(0.97±0.02), (1.46±0.03), t=15.24, P<0.05], 相关的增殖蛋白Cyclin D1、Cyclin E也低(t=11.41, 13.15, 均P<0.05)。转染+抑制剂组细胞凋亡率高于转染+溶媒组[流式细胞术:(26.11±0.86)%, (16.06±0.44)%, t=10.45, P<0.05], 相关的凋亡蛋白Caspase-3、Bax也高(t=19.06, 13.54, 均P<0.05)。转染+抑制剂组p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平均低于转染+溶媒组(t=36.67, 27.34, 均P<0.05)。ELISA结果显示, 转染+抑制剂组IL-1β、TNF-α水平均高于转染+溶媒组(t=15.17, 9.44, 均P<0.05)。比色法结果显示, 转染+抑制剂组LDH和MDA水平均高于于转染+溶媒组(t=15.33, 9.05, 均P<0.05), SOD水平则低于转染+溶媒组(t=11.04, P<0.05)。结论过表达lncRNA SNHG5促进了缺氧/复氧诱导的星形胶质细胞增殖, 并抑制了细胞凋亡、炎性反应和氧化应激。
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单位新乡医学院; 第二附属医院神经内科; 驻马店市中心医院
