依赖IL-5增殖的细胞株TF-1-9E3的驯化及验证

作者：李诗洁; 代维燕; 王雪莲; 柯文锋; 韩飞; 陈永奇; 刘畅^*; 白仲虎^*

来源：生物学杂志, 2023, 40(06): 109-114.

• IL-5
• TF-1细胞
• 增殖
• 阻断活性
• 细胞驯化

在IL-5靶点药物的发现阶段，为评价候选药物的阻断活性，需建立依赖IL-5增殖且信噪比高、重现性好的检测用细胞株。TF-1是人白血病细胞，其生长完全依赖IL-3或GM-CSF,而IL-5与IL-3和GM-CSF共用β(βc)受体，因此，研究以GM-CSF依赖的TF-1细胞株为来源，用IL-5替换TF-1细胞生长必需的生长因子GM-CSF,降低血清含量进行细胞驯化培养传代。通过35 d的细胞驯化及3～5次降血清传代培养，采用有限稀释法分离单克隆，一共得到14个单克隆细胞株。对14株细胞进行FACS检测，其中，有9个细胞株IL-5Rα表达量升高。对IL-5Rα过表达的细胞株进行IL-5增殖检测，结果表明，相比8%FBS得到的单克隆，6%FBS得到的单克隆对IL-5刺激更敏感。通过单因素优化实验，细胞增殖检测最优的细胞接种量为2×104个/孔，FBS含量为3%,血清品牌为Gibco。驯化后的细胞TF-1-9E3对IL-5的剂量-效应曲线的信噪比为3.19,Emax区间为2.15,可用于IL-5的生物学活性检测及IL-5与IL-5Rα的抗体阻断活性检测。

• 单位
  江南大学; 生物工程学院; 工业生物技术教育部重点实验室