重组腺病毒载体pAd-4-hMASP-2的构建

作者：张国超; 雒艳萍; 陆小铃; 王倩; 董信芳; 曹明强; 于红娟; 马兴铭

来源：中国生物制品学杂志, 2016, 29(11): 1141-1145.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.001495

• 甘露糖凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2
• 同源重组
• 腺病毒

目的利用p Yr-adshuttle-4质粒构建重组腺病毒载体p Ad-4-h MASP-2。方法应用PCR技术扩增甘露糖凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(human mannan-binding lectin associated serine protease-2,h MASP-2)基因,经Bam HⅠ和Eco RⅠ双酶切后与p Yr-adshuttle-4质粒连接,构建穿梭质粒p Yr-ads-4-h MASP-2,在LR酶作用下与腺病毒骨架载体p Ad/PL-DEST进行体外同源重组,获得重组腺病毒载体p Ad-4-h MASP-2,转染HEK293细胞,获得重组腺病毒r Adh MASP-2,应用酶切、PCR扩增及基因测序进行鉴定,并测定病毒滴度。将r Ad-h MASP-2感染小鼠,实时荧光定量PCR法检测h MASP-2基因m RNA在小鼠肺组织中的表达。结果重组穿梭质粒p Yr-ads-4-h MASP-2经双酶切及测序证实构建正确,通过同源重组获得了重组腺病毒载体p Ad-4-h MASP-2,扩增出滴度为1.5×109 PFU/ml的重组腺病毒颗粒r Ad-h MASP-2,其能在小鼠肺组织中表达。结论成功获得重组腺病毒载体p Ad-4-h MASP-2和重组腺病毒颗粒r Ad-h MASP-2,为体内外研究h MASP-2的活性提供了有效的转基因载体。

• 单位
  基础医学院; 兰州大学