miR-3677-3p在胃癌组织和癌细胞中表达及靶向抑制RAP1GAP对癌细胞增殖和侵袭影响

作者：普彦淞; 李真真; 段宝军; 马钰; 王建华^*; 高增战

来源：中华肿瘤防治杂志, 2021, 28(15): 1144-1150.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2021.15.05

• 胃癌
• miR-3677-3p
• RAP1GAP
• 增殖
• 侵袭

目的旨在揭示miR-3677-3p在胃癌组织中的表达情况,及其是否通过靶向RAP1 GTPase激活蛋白(RAP1GAP)影响胃癌细胞的增殖、凋亡和侵袭功能。方法收集2016-10-10-2018-06-08陕西省人民医院手术治疗的40例胃癌患者癌和癌旁组织(距离癌组织边缘>5 cm),qRT-PCR检测miR-3677-3p在临床组织标本及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SNU-1、AGS、HGC-27、SGC-7901)的表达情况。选取AGS细胞进行转染,分为NC inhibitor组、miR-3677-3p inhibitor组、NC mimics组、miR-3677-3p mimics组、si-NC组、si-RAP1GAP组和si-RAP1GAP+miR-3677-3p inhibitor组。采用qRT-PCR检测转染效率,CCK-8法、流式细胞仪和Transwell分别检测转染NC inhibitor、miR-3677-3p inhibitor、si-RAP1GAP+miR-3677-3p inhibitor对AGS细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。各组数据经Shapiro-Wilk检验符合正态分布,2组比较采用t检验,多组比较采用单因素方差分析,组间的多重比较采用LSD-t检验。结果 miR-3677-3p在胃癌组织的相对表达量(2.443±1.006)显著高于癌旁对照组织(1.000±0.265),差异有统计学意义,t=8.941,P<0.001。miR-3677-3p在胃癌细胞株SNU-1(1.975±0.310)、AGS(2.439±0.635)、HGC-27(2.223±0.462)和SGC-7901(1.604±0.405)相对表达水平显著高于GES-1细胞(1.000±0.173),差异有统计学意义,F=8.846,P<0.001。miR-3677-3p inhibitor组细胞增殖水平(0.873±0.132)与NC inhibitor组(1.323±0.122)相比显著下降,差异有统计学意义,t=5.598,P<0.001。miR-3677-3p inhibitor组细胞凋亡比例(33.11±5.36)与NC inhibitor组(9.17±2.12)相比显著增高,差异有统计学意义,t=9.287,P<0.001。穿过Transwell小室的细胞数量miR-3677-3p inhibitor组(78.52±21.25)与NC inhibitor组(232.30±33.65)相比显著下降,差异有统计学意义,t=8.642,P<0.001。双荧光素酶报告基因结果显示miR-3677-3p能够结合RAP1GAP的3′UTR。RAP1GAP的mRNA相对表达水平miR-3677-3p inhibitor组(3.210±0.540)显著高于NC inhibitor组(1.000±0.242),差异有统计学意义,t=8.351,P<0.001,蛋白质印迹法也得出了类似结果。功能回复实验显示,si-RAP1GAP部分逆转了miR-3677-3p inhibitor对AGS细胞的增殖、凋亡和侵袭的影响。结论 miR-3677-3p在胃癌组织和细胞中高表达,其可能通过靶向抑制RAP1GAP的表达,进而调控了胃癌细胞的增殖、凋亡和侵袭。

• 单位
  陕西省人民医院