Thermobifida fusca海藻糖合成酶基因的克隆表达及发酵优化

作者：罗锋; 段绪果; 宿玲恰; 吴敬

来源：中国生物工程杂志, 2013, 33(08): 93-99.

DOI：10.13523/j.cb.20130815

• 嗜热单孢菌
• 海藻糖合成酶
• 重组大肠杆菌
• 发酵优化

将来源于嗜热单孢菌(Thermobifida fusca)的海藻糖合成酶基因进行克隆表达,构建重组菌E.coli BL 21(DE3){pET-24a(+)/Tres}。并对基因工程菌的发酵产酶条件进行优化,得到最优培养基成分为:甘油12 g/L,酵母粉24 g/L,蛋白胨12g/L,磷酸盐浓度60mmol/L,Zn2+2mmol/L。最佳培养条件为:装液量20 ml(250 ml摇瓶),发酵2 h后25℃诱导并添加终浓度为0.4 mmol/L的IPTG。优化后的最终发酵酶活达到28.6 U/ml,为未优化前的3.4倍,是目前国内报道大肠杆菌摇瓶发酵产海藻糖合成酶的最高表达水平,为该酶的工业化生产奠定了基础。

• 单位
  食品科学与技术国家重点实验室; 江南大学; 生物工程学院; 工业生物技术教育部重点实验室