摘要
目的观察缺氧状态下人视网膜色素上皮(h RPE)细胞中音猥因子(Shh)与血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系。方法传代培养h RPE细胞,取对数生长期36代细胞用于实验。将h RPE细胞分为正常对照组、缺氧实验组及环巴明抑制组。缺氧实验组加入100μmol/L Co Cl2,环巴明抑制组于制作缺氧状态前1 h加入20μmol/L的环巴明进行预处理。3组细胞培养4、8、12、24 h。采用荧光定量聚合酶链反应检测3组h RPE细胞中Shh、VEGF m RNA表达。采用酶联免疫吸附法检测正常对照组、缺氧实验组细胞培养上清液中Shh、VEGF蛋白表达。采用Pearson相关性分析法分析缺氧实验组h RPE细胞中Shh、VEGF m RNA表达与蛋白表达之间的关系。结果正常对照组可见少量Shh、VEGF m RNA及蛋白表达。缺氧实验组Shh、VEGF m RNA及蛋白表达较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(F=178.364、183.732、77.456、91.572,P<0.01)。环巴明抑制组Shh、VEGF m RNA表达较缺氧实验组明显降低,差异有统计学意义(F=68.745、121.834,P<0.01)。相关性分析结果显示,缺氧实验组h RPE细胞中Shh蛋白表达与VEGF蛋白表达呈正相关(r=0.942,P<0.05);Shh m RNA表达与VEGF m RNA表达呈正相关(r=0.970,P<0.01)。环巴明抑制组h RPE细胞中Shh m RNA表达与VEGF m RNA表达无相关性(r=0.915,P>0.05)。结论缺氧状态下h RPE细胞中Shh与VEGF表达呈正相关。
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