微小RNA-29a对心肌细胞缺血再灌注损伤作用及机制

作者：孙小林; 孟凡棣; 贾政; 耿玥; 韦杰^*

来源：中国临床药理学杂志, 2023, 39(17): 2477-2481.

DOI：10.13699/j.cnki.1001-6821.2023.17.010

• 微小RNA-29a
• 磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B信号通路
• 心肌缺血再灌注损伤

目的 探讨微小核RNA-29a(miR-29a)在缺血再灌注引起的心肌细胞损伤中的功能和分子机制。方法 体外培养H9c2大鼠心肌细胞，并将其分为正常对照组(正常培养的H9c2细胞)、缺氧再灌注(H/R)组(缺氧处理4 h,继而复氧4 h)、H/R+miR-29a inhibitor组(在H/R组基础上转染miR-29a抑制剂)、H/R+miR-29a inhibitor+LY294002组(在H/R+miR-29a inhibitor组基础上加用2μg·mL-1抑制剂LY294002)。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-29a和磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)的表达水平；使用细胞计数试剂盒8(CCK-8)试剂盒检测细胞活力；通过流式细胞术和原位末端标记(TUNEL)实验检测细胞凋亡；使用试剂盒检测乳酸盐脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性；通过双荧光素酶报告实验验证miR-29a和PI3K的靶向关系。结果 对照组、H/R组和H/R+miR-29a inhibitor组细胞miR-29a表达水平分别为1.05±0.02、4.13±0.15、1.56±0.21,细胞活力分别为(100.00±0.08)%、(50.02±0.13)%和(83.65±0.04)%,CK含量分别为(71.46±0.08)、(140.22±0.14)和(98.86±0.25)U·L-1,NC组上述指标和H/R+miR-29a inhibitor组与H/R组比较，差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。H/R+miR-29a inhibitor组中磷酸化p-PI3K蛋白(0.73±0.09)和磷酸化蛋白激酶B (p-AKT)蛋白表达(0.82±0.04)显著高于H/R组中p-PI3K蛋白(0.29±0.09)和p-AKT蛋白表达(0.39±0.24),差异均有统计学意义(均P<0.01),在加入PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002后p-PI3K和p-AKT的表达水平下调。结论 miR-29a可促进心肌细胞凋亡，敲降miR-29a可以保护心肌细胞免受H/R损伤，miR-29a对H/R心肌细胞的保护作用是通过激活PI3K/AKT通路实现的。

• 单位
  昆明市延安医院