EGFP作为报道基因在研究WT1基因调控元件中的应用

作者：胡绍燕; 陈子兴; 赵晔; 傅铮铮; 何军; 岑建农; 谷敏

来源：中国实验血液学杂志, 2007, 15(03): 599-602.

DOI：10.3969/j.issn.1009-2137.2007.03.033

• EGFP
• WT1基因
• 启动子
• 增强子
• K562细胞

本研究调查EGFP基因作为报道基因在研究WT1基因调控功能中应用的可行性。利用基因重组技术分别将WT1基因启动子和增强子的功能片段构建到质粒pEGFP-1载体中,转化感受态E.coli菌细胞,筛选了阳性转化菌落,通过限制性酶切鉴定重组质粒插入片段正确的菌落,抽提重组质粒DNA;同时将重组质粒转染K562细胞,通过荧光显微镜检测重组质粒的功能。结果表明:通过基因重组技术分别构建了含有WT1基因启动子的载体(pEWP)和含有WT1基因启动子和增强子的载体(pEWPE、pEWPA和pEWPD)。转染48小时后,pEWP、pEWPE、pEWPA和pEWPD的K562细胞在荧光显微镜下能够显示荧光,而转染了空载体pEGFP-1的K562细胞未出现荧光。结论:EGFP基因作为报道基因可以用于WT1基因调控功能的研究,为进一步开展基因治疗创造了条件。

• 单位
  江苏省血液病研究所; 苏州大学附属儿童医院; 苏州大学附属第一医院