寨卡病毒包膜蛋白Y158H突变对乙脑/寨卡嵌合病毒感染小鼠脑内神经毒力的影响

作者：李玥珂; 冯亚岚; 任阳; 陈岚; 黄荣; 周仲辉; 杨健^*

来源：中国病原生物学杂志, 2021, 16(06): 655-660.

DOI：10.13350/j.cjpb.210608

• 乙脑/寨卡嵌合病毒
• E蛋白
• 突变
• 神经毒力

目的研究乙脑/寨卡嵌合病毒(Japanese encephalitis/Zika chimeric virus, JE/ZIKV)包膜蛋白(envelope protein, E蛋白)第158位氨基酸Y158H突变对感染小鼠脑内神经毒力的影响。方法运用重叠延伸PCR技术和基因克隆技术构建含Y158H突变全长cDNA的质粒,单酶切形成线性化DNA分子后体外转录获得RNA,电转染BHK21细胞完成重组病毒包装。通过病毒基因测序、间接免疫荧光试验、生长曲线及蚀斑试验鉴定病毒,通过动物试验评价病毒的小鼠脑内神经毒力。结果基因测序和酶切证实,成功构建含突变位点Y158H全长cDNA质粒。蚀斑试验和病毒基因测序、间接免疫荧光试验证实成功完成病毒的拯救,JE/ZIKV蚀斑直径(1.7±0.2)mm, JE/ZIKV(Y158H)蚀斑直径(1.6±0.1)mm,两种病毒的蚀斑大小差异无统计学意义(P>0.05)。两种病毒增殖规律相似,但整个过程中JE/ZIKV(Y158H)的增殖效率略低于母本病毒。分别用两种病毒进行动物试验,JE/ZIKV(Y158H)的LD50为58.93 PFU/0.03 ml, JE/ZIKV为2.21 PFU/0.03 ml, JE/ZIKV(Y158H)的毒力低于JE/ZIKV。结论 ZIKV E蛋白Y158H位点突变可降低嵌合病毒对小鼠脑内神经毒力,E158是影响E蛋白神经毒力的重要氨基酸之一。

• 单位
  川北医学院附属医院; 基础医学院; 川北医学院