Leifsonia菌β-葡萄糖苷酶（Lf18920）的酶学性质研究及对藏红花素转化作用的初步研究

作者：王茜; 许光治^*

来源：中国食品添加剂, 2023, 34(02): 11-18.

DOI：10.19804/j.issn1006-2513.2023.02.002

• β-葡萄糖苷酶
• 藏红花苷
• 酶学性质
• 克隆
• 表达

克隆表达了一种赖氏菌（leifsonia spp. ZF2019）的一个GH3家族糖苷酶基因（Lf18920），以pET-28a-HMT为载体构建了表达质粒，在大肠杆菌BL21中诱导表达，用Ni-NTA柱纯化表达蛋白。研究了该酶的底物特异性及动力学参数，分析了温度、pH、金属离子等因素对该酶活性的影响，并采用高效液相色谱和液质联用色谱探究了该酶对藏红花素的转化作用。结果表明：该酶与4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（4-nitrophenyl beta-D-glucopyranoside,pNPG）的亲和力最强，对底物pNPG的特征常数Vmax和Km分别为0.155U/mg和1.97 mmol/L。该β-糖苷酶的最适温度为40℃，最适pH为5.0；低浓度的Zn2+使酶活提高了37%左右，SDS和吡啶可以使酶完全失活，可耐受1%的尿素（仍能保持77%的相对酶活）。该酶能部分水解藏红花素，但不能将其彻底水解成藏红花酸。研究结果表明，该酶可用于以藏红花素为底物的不同水解度藏红花苷的制备。

• 单位
  浙江农林大学