重组人重链铁蛋白纳米粒的构建、表达及鉴定

作者：李凯; 许汪; 于潼; 于成东; 姜宇航; 陈振海^*; 田明尧^*; 金宁一^*

来源：中国病原生物学杂志, 2020, 15(08): 877-880.

DOI：10.13350/j.cjpb.200803

• 铁蛋白
• 纳米粒
• 胞外自组装
• 重组蛋白
• 疾病诊治

目的通过原核表达人重链铁蛋白基因(recombinant human H-chain ferritin,rHF),为新型纳米疫苗的研制提供新方法和手段。方法将人源性铁蛋白氨基酸序列按照大肠杆菌常用密码子进行优化,合成重组人重链铁蛋白(rHF)基因并克隆至原核表达载体pET-32a。通过双酶切、测序鉴定阳性重组质粒,将阳性质粒转入感受态细胞BL21(DE3),再经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。通过镍柱纯化重组蛋白。结果成功构建并表达纯化重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白产物,利用电子透射显微镜观察重组蛋白构型。重组铁蛋白以可溶性形式存在于蛋白上清,并具有生物学活性。且能够胞外自组装成具有12-20nm狭窄尺寸分布的纳米笼结构。结论采用大肠埃希菌表达系统可表达可溶性rHF蛋白并具有纳米粒结构,为新型纳米疫苗的研制以及疾病诊治提供了理论基础。

• 单位
  扬州大学