通用型和O型口蹄疫病毒二重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

作者：王淑娟; 王东方; 刘影; 杨海波; 赵胜杰; 曹伟伟; 王翠; 赵雪丽; 马震原; 闫若潜^*

来源：中国兽医杂志, 2020, 56(09): 20-25.

• 口蹄疫病毒
• 二重荧光定量RT-PCR
• 建立
• 应用

为建立通用型和O型口蹄疫病毒(FMDV)二重荧光定量RT-PCR检测方法,本试验根据GenBank已登录的不同亚型FMDV通用序列和O型FMDV序列设计了2对特异性引物和2条TaqMan MGB探针,经过反应条件和体系优化,建立了通用型(T型)和O型FMDV的二重荧光定量RT-PCR(FQ-PCR)检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;对15份临床疑似样品进行了应用检测。结果表明,成功建立通用型和O型FMDV二重FQ-PCR检测方法,该方法可特异性地扩增经灭活的O型、A型与AsiaⅠ型口蹄疫病毒标准株细胞培养物混合物,但对BHK-21细胞和PEDV、TGEV、SVV等病原对照不出现特异性扩增曲线,特异性好;检测模板最低极限为1.0×101拷贝/μL,敏感性高,重复性好;自15份临床疑似FMDV感染样品中检出9份FMDV-T阳性,7份FMDV-O阳性,检测结果与测序结果完全一致,且与国家口蹄疫参考实验室复核结果一致。本试验成功建立了通用型和O型FMDV二重FQ-PCR检测方法,为FMDV的快速检测及O型FMDV的分型诊断提供了特异、敏感、快速的方法。

• 单位
  河南省动物疫病预防控制中心