实时荧光定量PCR技术快速检测志贺氏菌

作者：戴陈伟; 童琳; 武昌俊; 许勇; 李舜; 朱倩云; 蔡标^*

来源：食品安全质量检测学报, 2019, 10(23): 8037-8041.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2019.23.040

• 志贺氏菌
• 实时荧光定量PCR
• 标准曲线
• 特异性
• 灵敏性

目的建立实时荧光定量PCR法快速检测志贺氏菌。方法提取志贺氏菌基因组为模板扩增virA基因片段,将目的片段连接至pMD19-T载体得到重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,验证所得到的重组质粒,以紫外分光光度计测量重组质粒吸光度值A260,并换算为质粒拷贝数后作梯度稀释得到不同浓度的质粒标准品;进行荧光定量PCR分析并通过特异性、灵敏性实验以验证该方法的可行性。结果重组质粒标准品浓度在103～108 copies/μL范围内线性关系良好(r2>0.99),实时荧光定量PCR检测志贺氏菌时出现良好的扩增曲线,鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未出现扩增曲线。志贺氏菌的检出限为100CFU/m L。结论本方法便捷、高效、可靠,可用于志贺氏菌的快速定性定量检测。

• 单位
  安徽省医学科学研究院