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摘要
A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)是一种新近流行的小RNA病毒，严重危害着全球养猪业的健康发展。SVA病毒结构蛋白2(viral structural protein 2, VP2)在诱导机体免疫应答中发挥了重要的作用。为制备可溶性的SVA结构蛋白VP2，并系统分析其免疫原性，本研究首先以SVA/CH-FJ-2017毒株基因序列为基础，构建SVA-VP2蛋白重组表达质粒pET28a-SVA-VP2。然后将pET28a-SVA-VP2重组质粒与分子伴侣pTf16质粒共同转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)感受态细胞，利用分子伴侣TF(trigger factor)在原核表达系统中促进蛋白可溶性表达的特性，诱导表达可溶性的SVA-VP2重组蛋白。纯化目标蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定后，免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)，通过间接ELISA检测血清抗体水平，病毒中和试验测定中和抗体滴度，流式细胞术检测分析脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群，以及脾脏淋巴细胞增殖及细胞因子产生的情况。结果表明，利用分子伴侣TF16成功制备了可溶性的VP2重组蛋白，并且VP2重组蛋白能够与SVA阳性血清发生特异性免疫反应，免疫组小鼠的血清抗体效价可达1∶32 000，中和抗体水平可达1∶128，免疫组小鼠脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比含量极显著高于对照组(P<0.001)，干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)、白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)、IL-4和IL-10等细胞因子表达水平极显著高于对照组(P<0.001)。本研究成功利用分子伴侣TF共表达制备了可溶性的重组VP2蛋白，且重组VP2蛋白在体内、外试验中均具有良好的免疫原性，能够引发机体产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答，为SVA亚单位疫苗和诊断制剂的研制提供了实验材料和理论依据。
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