不同荧光标记检测抗体组合及不同抗凝剂对流式测定食蟹猴T淋巴细胞亚群的影响

作者：姜华; 刘丽; 李路路; 苗玉发; 文海若; 孙立; 王欣; 张颖丽; 李伟; 霍艳^*; 耿兴超^*

来源：中国医药生物技术, 2021, 16(05): 391-399.

• 外周血T淋巴细胞亚群
• 流式细胞测定法
• 食蟹猴
• 荧光标记检测抗体
• 抗凝剂

目的比较不同荧光标记检测抗体组合与不同抗凝剂对检测食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群的影响,为相关检测提供方法参考。方法取肝素钠抗凝猴血50 μl分别与两组荧光检测抗体PerCP-CD3/FITC-CD8/PE-CD4 (检测抗体组合 1) 和PerCP-CD3/FITC-CD4/PE-CD8 (检测抗体组合 2)孵育,流式细胞仪测定CD3+CD4+和CD3+CD8+淋巴细胞百分比和平均荧光强度(MFI),并计算CD3+CD4+和CD3+CD8+淋巴细胞比值,比较不同荧光标记抗体组合检测食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群的结果。取肝素钠和乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝猴血各50μl分别与上述两组荧光检测抗体组合进行孵育,测定 CD3+CD4+和CD3+CD8+淋巴细胞百分比和MFI,计算这两种淋巴细胞亚群比值,比较不同抗凝剂对食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群检测结果的影响。结果 (1)肝素钠抗凝猴血荧光检测抗体测定T淋巴细胞亚群的结果显示,FITC标记抗CD4抗体检测到的CD4+T淋巴细胞百分比和MFI均显著低于PE标记抗CD4抗体检测到的CD4+T淋巴细胞百分比和MFI,同样,FITC标记抗体检测到的CD8+T淋巴细胞百分比和MFI均显著低于PE标记抗体检测到的相应结果,应用检测抗体组合2的CD3+CD4+/CD3+CD8+淋巴细胞比值显著低于应用检测抗体组合1的,雌、雄动物均出现前述结果,雌性动物的变化更为显著。(2)应用抗体组合1检测时,与肝素钠抗凝组相比,EDTA-K2抗凝剂组CD3+CD4+淋巴细胞百分比显著增加、CD3+CD8+淋巴细胞百分比和CD8+MFI显著降低,CD3+CD4+/CD3+CD8+淋巴细胞比值显著增加;应用抗体组合2检测时,仅发现EDTA-K2抗凝组比肝素钠组CD8+MFI显著降低,未见其他有意义的变化。结论 FITC标记抗CD4抗体和抗CD8抗体检测相应细胞百分比和荧光强度均小于PE标记的抗体,在应用这两种荧光标记抗体进行T淋巴细胞亚群检测时应注意对试验结果的影响和合理分析。使用EDTA-K2抗凝对食蟹猴外周血CD8+淋巴细胞测定结果有明显影响,在进行食蟹猴T淋巴细胞亚群测定时宜使用肝素钠抗凝剂。

• 单位
  中国食品药品检定研究院