1.2倍基因组长度C2亚型HBV重组体的表达和多肽分析

作者：鞠晓梅; 汝佳秋; 夏妍; 金茜; 杜博; 郭梦蕊; 曹馨阳; 李佳琪; 张淑云^*

来源：国际免疫学杂志, 2023, 46(02): 117-128.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2023.02.001

• 乙型肝炎病毒
• 乙型肝炎病毒C2亚型
• 1.2倍乙型肝炎病毒质粒
• 乙型肝炎病毒多肽
• 质谱

目的获得乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)C2蛋白的HBV多肽。方法同源重组法构建含1.2倍HBVC2全基因组表达重组体;脂质体法转染HepG2和Huh-7细胞;荧光定量PCR法检测HBV DNA水平;双抗体夹心酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)的水平;免疫荧光法检测核心抗原(HBcAg)水平和分布。电转染法转染人永生化B淋巴细胞系(B-lymphoblastoid cell line, BLCL), 液相色谱串联质谱(liquid chromatography-mass spectrography/mass spectrometry, LC-MS/MS)法分离鉴定HBV多肽, 生物信息学预测亲合力, 并检索已报道序列。结果成功构建了含3881 bp目的片段的HBVC2全基因组的重组体, 即pAAV/HBV1.2C2。HepG2和Huh-7细胞转染重组体后24、48和72 h, 培养上清液中HBV DNA、HBsAg和HBeAg均呈现较高水平;HBcAg多分布在细胞核, 均在48 h表达水平达高峰。从5株BLCLs细胞裂解液中检出来源于HBsAg、HBeAg和HBcAg的HBV多肽(序列长度≥8aa)共95条。比较分析共同序列和包含或重叠(≥8aa)序列, 67条多肽形成了11个HBV多肽热点核心区域, 有92条已见报道。51(53.68%)条多肽有相应的人类白细胞表面抗原(human leukocyte antigen, HLA)等位基因分型, 而与5株细胞所携带HLA等位基因一致的共有21条。结论成功构建和表达了pAAV/HBV1.2C2, 获得了真实世界的HBVC2多肽谱。

• 单位
  哈尔滨医科大学附属第二医院