同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的四重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

作者：高艺祥; 王金凤; 张倩; 孙晓霞; 刘立兵; 顾文源; 马宏伟; 韩庆安^*; 马增军^*; 王建昌^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(03): 448-461.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.03.04

• 猪德尔塔冠状病毒
• 猪传染性胃肠炎
• 猪轮状病毒
• 猪流性腹泻病毒
• 四重实时荧光RT-PCR

为实现对猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)、猪传染性胃肠炎(porcine transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)和猪流性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的同时鉴别检测，根据PDCoV M基因、TGEV S基因、PoRV VP6基因和TGEV N基因保守区域序列合成特异性引物和TaqMan探针，通过优化反应条件，成功建立了一种可同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的实时荧光RT-PCR方法。结果显示，所建立的四重实时荧光RT-PCR方法仅对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV出现阳性扩增，与PRV、PPV、PRRSV、CSFV、PCV2等猪常见病原无交叉反应；对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的最低检出限分别为1.17×103,1.13×103,1.31×102和1.18×102拷贝；重复性好，组内和组间试验变异系数均小于4.5%。进一步应用所建立的同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的实时荧光RT-PCR方法对199份采集自河北省不同地区腹泻猪的临床样品进行检测，结果检出23份PoRV阳性(11.56%)、12份PEDV阳性(6.03%)和1份TGEV阳性(0.50%),均为单一感染；未检出PDCoV阳性。本研究所建立的四重实时荧光RT-PCR检测方法可实现对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的同时鉴别检测，为实验室快速鉴别诊断猪病毒性腹泻提供了有效的技术支持。

• 单位
  河北科技师范学院; 动物科技学院