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摘要
目的 基于ROCK2-shRNA转染技术，探讨温肺降浊方对血管性痴呆大鼠学习、记忆能力及海马组织病理形态的影响。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、ROCK2干扰组、阴性对照组、中药+ROCK2干扰组，每组10只。除假手术组外，其余组均采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备血管性痴呆模型。造模成功后，ROCK2干扰组及中药+ROCK2干扰组将AAV9-ROCK2-shRNA注射至大鼠海马组织，ROCK2干扰组同时给予生理盐水灌胃4周，中药+ROCK2干扰组同时给予温肺降浊方2 g/(kg·d)灌胃4周；阴性对照组同法注射空载体腺相关病毒，同时给予生理盐水灌胃4周；中药组给予温肺降浊方2 g/(kg·d)灌胃4周，假手术组、模型组给予生理盐水灌胃4周。分别于术后1周及4周，采用Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力；术后4周处死各组大鼠，电镜观察海马神经元突触超微结构，尼氏染色法观察海马组织中神经元的分布、形态及尼氏小体数量，Tunel染色检测海马神经元凋亡情况。结果 术后1周，模型组与各干预组大鼠逃避潜伏期、跨越平台次数比较差异均无统计学意义(P均>0.05);术后4周，与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05);与模型组比较，中药组、ROCK2干扰组及中药+ROCK2干扰组大鼠逃避潜伏期均明显缩短(P均<0.05),跨越平台次数均明显增加(P均<0.05);与ROCK2组及中药组比较，中药+ROCK2干扰组大鼠逃避潜伏期更短(P均<0.05),穿越平台次数更多(P均<0.05)。与假手术组比较，模型组大鼠神经元分布散乱，突触形态紊乱，细胞器破裂消失，尼氏小体数目明显减少(P<0.05),海马神经元细胞凋亡数明显增加(P<0.05);与模型组比较，中药组、ROCK2干扰组及中药+ROCK2干扰组大鼠神经元损伤明显改善，海马神经元突触形态及细胞器结构较完整规则，尼氏小体数量明显增加(P均<0.05),海马神经元细胞凋亡数明显减少(P均<0.05);与ROCK2组及中药组比较，中药+ROCK2干扰组大鼠神经元突触形态更规则、细胞器更完整，且尼氏小体数目明显增多(P均<0.05),海马神经元细胞凋亡数明显减少(P均<0.05);中药组与ROCK2干扰组各观察指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 温肺降浊方能明显改善血管性痴呆大鼠的学习与记忆能力，机制可能与其能降低ROCK2表达，进而抑制RhoA/ROCK2信号通路的传导，改善海马神经元结构损伤，减少神经细胞凋亡有关。
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单位广西中医药大学; 广西中医药大学第一附属医院
