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摘要
目的研究细胞密度是否会对从人卵巢透明细胞癌系ES-2和卵巢腺癌细胞A2780中分离的癌干细胞产生影响。方法将ES-2、A2780细胞置于含生长因子、牛血清白蛋白和人胰岛素的无血清培养基中培养,采用连续传代诱导培养癌干细胞。观察不同细胞密度下ES-2、A2780细胞形态变化,流式细胞术分别检测含血清培养基(SSM)组、无血清培养基(SFM)组细胞诱导前后细胞表面标志CD133、CD44表达的改变。软琼脂克隆形成实验检测不同诱导条件下ES-2癌干细胞球生长速度和成瘤能力。结果 2×104 mL-1密度下,ES-2细胞能在SFM中存活,但不能形成癌干细胞球;5×104、1×104 mL-1 ES-2细胞能在SFM中存活、增殖并形成癌干细胞球。与贴壁的细胞及诱导前相比,诱导后形成的癌干细胞球(1×105 mL-1组、5×105 mL-1组)高表达CD133+、CD44+(P<0.05),传代后具有更高的增殖能力和克隆形成能力,且5×104 mL-1密度下,癌干细胞球成瘤能力更强。A2780细胞分别以1×104、3×104、5×104 mL-1的密度接种于SFM中,10d后,1×104、3×104 mL-1组中形成细胞团,但3×104 mL-1组中形成的细胞团更大,透光性更强,细胞更致密,5×104 mL-1组未形成细胞悬浮球。流式细胞术发现A2780细胞3×104 mL-1组中细胞与1×104 mL-1组相比,CD133+细胞阳性率更高,差异有统计学意义(P<0.05)。3×104 mL-1组的细胞生长速度最快。结论细胞密度5×104 mL-1和3×104 mL-1分别是诱导ES-2、A2780细胞株卵巢肿瘤干细胞球的合适条件。
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单位四川大学华西第二医院; 四川大学
