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摘要
目的：筛选五子衍宗丸干预半去势雄性小鼠生精功能相关的转录组，探讨其在干预生精功能低下进展中的潜在作用机制。方法：Balb/c小鼠按体质量随机分为假手术组、模型组、丙酸睾丸素组、五子衍宗丸组，每组12只，模型组和给药组摘取右侧睾丸和附睾构建半去势生精功能低下模型，假手术组仅剪开毛皮和右侧阴囊并立即消毒缝合，饲养1周后，五子衍宗丸组每天灌胃五子衍宗丸混悬液1.56 g·kg-1，丙酸睾丸素组肌肉注射丙酸睾丸素0.2 mg·kg-1，每周2次，假手术组和模型组每天灌胃等体积生理盐水，连续给药3周。干预结束后，苏木素-伊红（HE）染色观察睾丸组织病理；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清睾酮（T）、促黄体生成素（LH）和卵泡刺激素（FSH）含量；小动物精子自动检测仪测定附睾精子数量和活力；利用转录组学芯片技术检测各组睾丸组织mRNA表达水平，筛选五子衍宗丸调控相关基因转录组，并从中任选3条mRNA进行实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）验证转录组数据。验证合格的转录组数据通过基因本体（GO）注释分析及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析，解析五子衍宗丸调控模型动物生精功能相关的生物条目及信号通路。结果：与假手术组比较，模型组小鼠睾丸组织出现生精损伤，生精小管腔收缩、空泡化、各级生精细胞减少、间隙变宽，生精细胞发育阻滞等形态异常；血清T显著降低，LH显著升高（P<0.01）,FSH升高但差异无统计学意义；附睾精子数量、活力均显著降低（P<0.01）；睾丸组织中有882条差异表达mRNA，其中565条上调，317条下调，聚类分析表明，这些差异表达的mRNA可以很好地区分假手术组与模型组。与模型组比较，五子衍宗丸组小鼠睾丸组织损伤减轻，生精小管腔结构完整、空泡化减少、各级生精细胞明显增加、排列紧密；血清中T显著升高，LH显著下降（P<0.01）,FSH下降但差异无统计学意义；附睾中精子数量和活力显著提高（P<0.01）；五子衍宗丸可明显调控半去势小鼠睾丸的159条mRNA，其中32条上调，127条下调，经Real-time PCR验证转录组检测数据可靠。GO和KEGG分析显示，五子衍宗丸调控的转录组功能涉及到睾丸内间质细胞的性激素生成，生精细胞的更新、分化、代谢、凋亡、信号传导等精子发育的整个细胞周期过程，并和生精干细胞功能、内质网蛋白处理及代谢程序等信号通路的生物学行为密切相关。结论：五子衍宗丸可有效改善半去势雄性小鼠造成的生精功能低下，其机制可能与五子衍宗丸干预睾丸转录调节网络，调控睾丸间质细胞性激素合成、生精干细胞功能、精子发生的整个细胞周期过程，以及内质网蛋白处理及代谢程序相关基因转录的表达有关。
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单位内蒙古医科大学附属医院; 北京中医药大学; 河北医科大学第一医院; 中国中医科学院中药研究所; 中国中医科学院望京医院; 北京体育大学
