LIM结构域蛋白FHL1C与GNB2不存在相互作用

作者：刘娟; 赵俊龙; 王媛媛; 韩骅; 秦鸿雁; 张丙芳

来源：山西医科大学学报, 2015, 46(11): 1068-1073.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2015.11.005

• LIM结构域
• FHL1C
• GNB2
• 哺乳动物双杂交
• 免疫共沉淀

目的通过哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证经质谱技术获得的LIM结构域蛋白FHL1C相互作用候选分子GNB2与FHL1C之间是否存在相互作用,从而丰富FHL1C调控Notch信号通路的机制。方法分别构建融合质粒p CMVGAL4-DBD-FHL1C和p CMV-VP16-GNB2,并将其共转染He La细胞,通过哺乳动物双杂交实验验证两者在细胞内是否具有相互作用;构建带Flag标签的GNB2融合蛋白的重组载体p CMV-Flag-GNB2,酶切鉴定正确后,与带myc标签的FHL1C融合蛋白的重组真核表达载体p CMV-myc-FHL1C共转染He La细胞,利用免疫共沉淀技术检测GNB2与FHL1C之间是否存在生理上的相互作用。结果哺乳动物双杂交实验和免疫共沉淀实验均显示:FHL1C与GNB2之间不存在生理上的相互作用。结论成功构建了实验所需的GNB2的融合蛋白真核表达重组载体,利用哺乳动物双杂交实验及免疫共沉淀技术证实FHL1C与GNB2之间不存在相互作用。

• 单位
  西京医院; 第四军医大学; 肿瘤生物学国家重点实验室