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摘要
油茶(Camellia oleifera)是中国重要的油料经济作物，炭疽病是影响油茶产业发展的重要因素之一，引起油茶落花落果直接性的导致茶油减产。果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)是全国油茶炭疽病的优势致病菌。基因敲除技术在研究基因功能的过程中扮演着日益重要的角色，为深入探索油茶果生炭疽病致病基因的功能，本研究以湖南省攸县油茶种植基地分离的炭疽病菌YX2-5-2为原材料提取DNA，基于同源重组的方法构建了带有潮霉素标记基因的DNA融合片段，通过PEG介导的原生质体遗传转化，在含有200 μg/mL潮霉素的培养基上多次筛选得到阳性转化菌株，利用PCR技术进一步对效应子缺失突变体进行验证，构建获得了敲除菌株△Cfhep3、△Cfhep4、△Cfhep5、△Cfhep6，并从同源片段的浓度、转化反应时间和原生质体浓度对初步建立的敲除体系进行优化，筛选出了最优转化条件：进行效应子敲除时，重组片段浓度设置在300～350 ng/μL，转化时间为2.5～3.5 h，原生质体浓度为1×1010～1×1011个/mL时可达到10%～20%的转化效率。本研究结果对油茶炭疽菌果生刺盘孢效应子敲除体系的构建进行了优化，提高了油茶炭疽菌效应子敲除效率，为深入研究植物病原菌致病分子机制提供了一定实验基础。
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