传染性法氏囊病病毒和禽致病性大肠杆菌的二重探针实时荧光定量PCR方法的建立与应用

作者：陈金南; 陈睿; 李尚泉; 李静玲; 陈容慧; 农芳婷; 王威威; 李宜海; 王林果; 韦平; 何秀苗^*

来源：中国家禽, 2023, 45(09): 31-37.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.09.006

• IBDV
• 禽致病性大肠杆菌
• 混合感染
• 二重FQ-PCR

为建立用于传染性法氏囊病病毒(IBDV)和禽致病性大肠杆菌混合感染快速鉴别检测的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法，研究分别根据IBDV VP2基因和大肠杆菌UidA基因设计合成特异性引物和探针，通过普通PCR方法扩增目的基因片段并克隆至pGM-T载体，构建重组质粒p GM-T/VP2和pGM-T/UidA作为标准品，通过正交试验确定引物和探针的最佳浓度，分别建立基于VP2和UidA基因的标准扩增曲线，并进一步验证其特异性、灵敏性、重复性，建立的方法应用于人工感染样本和临床样本的检测，并与常规PCR方法进行比较。结果显示：VP2和UidA基因的最佳上、下游引物浓度均为0.30μmol/L,VP2和UidA基因的探针浓度分别为0.35μmol/L和0.25μmol/L;VP2和UidA基因扩增的线性范围均为103～107拷贝/μL，相关系数R2≥0.99，灵敏度均为100拷贝/μL；两者组间及组内变异系数均小于2%；人工感染样品与临床样品的检测结果与普通PCR方法一致。研究表明，建立的二重探针FQ-PCR方法为同时检测IBDV和禽致病性大肠杆菌提供了快速、敏感、特异且能满足临床样本需求的检测方法。

• 单位
  广西民族大学; 普莱柯生物工程股份有限公司; 广西大学