双峰驼FCGRT基因的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：刘丽萍; 火兴民; 谢飞; 张旺东; 吴秀萍; 李瑞; 陆佳; 王雯慧^*

来源：动物医学进展, 2021, 42(04): 39-43.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2021.04.009

• 双峰驼
• FCGRT基因
• FcRn重组蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

为制备抗双峰驼FcRn的抗体,首先从NCBI收录的双峰驼FCGRT基因序列中选取编码区,经跨膜结构和信号肽预测分析,截取不含信号肽的膜外序列并构建重组质粒pET-28a-FcRn,然后在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达及表达条件优化,用纯化后的FcRn重组蛋白免疫家兔,制备抗双峰驼FcRn的多克隆抗体,并通过间接ELISA和Western blot检测效价及其特异性。结果表明,获得的FcRn重组蛋白与预期大小一致(34 ku),且以包涵体形式表达,其最佳IPTG诱导浓度为0.3 mmol/L,诱导时间为6 h。ELISA检测抗体效价为1∶32 000,Western blot鉴定该抗体能与重组蛋白发生特异性结合。说明已成功制备了高效价和特异性良好的兔抗双峰驼FcRn多克隆抗体。

• 单位
  甘肃农业大学