环糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定点突变研究

作者：汤宏赤; 莫莉; 闭海; 林丽华; 郭媛; 庞浩^*

来源：广西科学, 2019, 26(04): 410-416.

DOI：10.13656/j.cnki.gxkx.20190808.006

• 环糊精水解酶
• 同源建模
• 底物通道
• 定点突变
• 蛋白结构
• 氨基酸

本研究对具有大分子水解能力的环糊精水解酶cds1-3的蛋白结构进行分析,选取底物通道相关氨基酸进行定点突变。通过比较突变酶和野生酶的功能差异,定位决定cds1-3特殊功能的氨基酸。采用sybyl 1.2进行蛋白质底物结合分析,选取和多聚体形成、底物结合以及底物通道相关的氨基酸Glu66、Pro48、Phe289为突变位点,反向PCR构建pSE380/E66G、pSE380/P48H、pSE380/F289A表达质粒并进行表达,获得酶活突变体并与原始酶进行底物特异性比较分析。其结果显示,突变酶E66G降解大分子底物木薯淀粉和支链淀粉的相对酶活力分别提高26.96%和23.15%,而对小分子底物普鲁兰糖的水解能力下降13.14%。因此,cds1-3是一个能水解大分子底物的特殊环糊精水解酶,氨基酸Glu66是cds1-3水解大分子支链淀粉的关键氨基酸之一。

• 单位
  广西科学院