益肾通络方对MN大鼠miR-514a-5p/ TNFSF15通路的影响及机制

作者：毛竞宇; 高飞; 张欣欣; 刘昊; 赵美姣; 陈素枝; 杨凤文; 檀淼; 檀金川

来源：中国实验方剂学杂志, 2021, 1-18.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20212407

• 膜性肾病
• 益肾通络方
• 足细胞
• miR-514a-5p
• TNFSF15

目的：基于miR-514a-5p/肿瘤坏死因子超家族成员15（TNFSF15）信号通路探讨益肾通络方抑制膜性肾病（MN）大鼠肾小球足细胞凋亡的分子机制。方法：SD大鼠采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）的方法建立MN大鼠模型，并使造模成功的MN大鼠随机分为模型组，益肾通络方高、中、低剂量组(26.44，13.22，6.61 g·kg-1)和贝那普利组(10 mg·kg-1)，每组各10只，取健康大鼠20只作为正常组，各组分别予对应药物灌胃，每日1次，连续干预4周。给药结束后检测大鼠24小时尿蛋白（UTP）水平，血清总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），白蛋白（ALB），肌酐（Scr），尿素氮（BUN）含量水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测大鼠肾组织中miR-514a-5p及TNFSF15 mRNA表达水平；免疫组化法（IHC）检测大鼠肾组织中足细胞标志蛋白足细胞裂孔膜蛋白（Nephrin），膜蛋白（Podocin），足萼蛋白（Podocalyxin），突触足蛋白（Synaptopodin），TNFSF15及足细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax），Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白（BAD），大分子B淋巴细胞瘤（BCL-XL）的表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾组织中TNFSF15，Bax，BAD，Bcl-2，BCL-XL的表达水平；原位末端标记法（Tunnel）检测大鼠肾组织细胞凋亡率。结果：与正常组相比，模型组大鼠UTP水平明显升高（P＜0.01），血清TC、TG均显著上升（P＜0.01），ALB显著下降（P＜0.01），BUN，Scr无显著变化；肾组织中miR-514a-5p水平明显降低（P＜0.05），TNFSF15 mRNA水平明显升高（P＜0.05）；足细胞标志蛋白Nephrin，Podocin，Podocalyxin，Synaptopodin表达降低（P＜0.05）；TNFSF15，Bax，BAD蛋白表达水平升高（P＜0.05），Bcl-2，BCL-XL蛋白表达水平降低（P＜0.05）；凋亡细胞明显增多（P＜0.05）。与模型组相比，益肾通络方各剂量组和贝那普利大鼠TC，TG，UTP水平有不同程度降低（P＜0.05，P＜0.01），ALB水平明显升高（P＜0.01），BUN，Scr水平无明显改变；肾组织中miR-514a-5p水平明显升高（P＜0.05），TNFSF15 mRNA水平明显降低（P＜0.05）；足细胞标志蛋白Nephrin，Podocin，podocalyxin，Synaptopodin表达升高（P＜0.05）；TNFSF15，Bax，BAD蛋白表达水平降低（P＜0.05），Bcl-2，BCL-XL蛋白表达水平升高（P＜0.05）；凋亡细胞明显减少（P＜0.05）。结论：益肾通络方可能通过miR-514a-5p/TNFSF15信号通路，减轻大鼠肾组织足细胞凋亡，缓解MN大鼠肾损伤。

• 单位
  河北医科大学第四医院; 河北中医学院