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摘要
目的:构建慢病毒介导的人孕烷X受体(hPXR)sh-RNA干扰载体及筛选肝癌细胞稳定干扰株。方法:针对hPXR的特异性序列,设计干扰序列,构建重组克隆。转染HEK293T细胞,筛选有效干扰片段。HEK293T包装干扰病毒并转染肝癌HepG2细胞株,200 mmol/L嘌呤霉素筛选2-3周,Western blot检测PXR表达。hPXR激动剂利福平处理PXR sh-RNA稳定干扰肝癌HepG2细胞株和Scramble对照细胞,抽提RNA并鉴定hPXR靶基因细胞色素P450 3A4(CYP3A4)的表达。结果:筛选出了PXR有效干扰片段,并获得了PXR信号通路有效敲低的HepG2慢病毒稳定干扰株。结论:成功构建了慢病毒介导的PXR sh-RNA稳定干扰HepG2细胞株。
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