miRNA-140-5p低表达促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化

作者：刘正标; 徐华; 周正宇; 衣昕^*

来源：中国临床研究, 2022, 35(08): 1041-1050.

DOI：10.13429/j.cnki.cjcr.2022.08.002

• 人骨髓间充质干细胞
• 成骨分化
• miRNA-140-5p
• Wnt1/β-catenin信号通路
• Runt相关转录因子2
• 碱性磷酸酶

目的 探讨miRNA-140-5p对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其可能的相关机制。方法 构建miRNA-140-5p模拟物(Mimic组)、抑制剂(Inhibitor组)、重组质粒pcDNA3.1-Wnt1及其相应的阴性对照并转染hBMSCs,应用CCK-8、茜素红染色、Elisa、qRT-PCR、Western blot等多种分子生物学技术检测hBMSCs的细胞活力和成骨分化情况，应用双荧光素酶报告基因系统验证miRNA-140-5p的靶基因。结果 转染后，Mimic组miRNA-140-5p表达水平显著升高，Inhibitor组显著降低(P<0.05),而hBMSCs的细胞活力在两组均无明显变化(P>0.05)。茜素红染色和成骨分化标志物Runt相关转录因子2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)蛋白检测结果显示Inhibitor组hBMSCs的成骨分化明显升高(P<0.05),Mimic组hBMSCs的成骨分化受到抑制(P<0.05)。双荧光素酶报告基因系统结果显示，Wnt1是miRNA-140-5p的靶基因。Western blot检测显示Wnt1和β-联蛋白(β-catenin)的表达水平在Mimic组降低(P<0.05),在Inhibitor组升高(P<0.05)。在hBMSCs中高表达Wnt1后，其成骨分化明显升高(P<0.05)。结论 miRNA-140-5p的低表达可以通过靶向Wnt1/β-catenin信号通路促进hBMSCs的成骨分化。

• 单位
  南通大学; 南通大学附属医院