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摘要
目的 利用网络药理学及动物实验探讨当归-白芍药对治疗复发性流产(recurrent spontaneous abortion, RSA)母胎界面血管生成障碍的作用机制，为中药的临床推广提供依据。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP)数据库和中药分子机制的生物信息学分析工具(bioinformatics analysis tool for molecular mechanism of traditional Chinese medicine, BATMAN-TCM)数据库收集并筛选当归-白芍药对的活性物质成分和作用靶点。在人类基因数据库(GeneCards)与在线人类孟德尔遗传(online Mendelian inheritance in man, OMIM)数据库中筛选RSA以及血管生成相关靶点。利用韦恩图(Venn)在线制图网站获得当归-白芍、RSA和血管生成的共同靶点，分别利用基因/蛋白相互作用检索搜查工具(search tool for the retrieval of interacting genes/proteins, STRING)数据库和Cytoscape对共同靶点进行蛋白互作网络分析(Protein-protein interaction, PPI)分析，构建药物、活性和共同靶点的作用网络。并且，对共同靶点进行富集分析。以雌性CBA/J小鼠配雄性DBA/2小鼠建立复发性流产模型，分别给予不同浓度当归-白芍水煎剂或黄体酮干预，以雌性CBA/J小鼠配雄性BALB/C小鼠建立正常妊娠模型，给予等体积生理盐水。所有小鼠均连续灌胃15 d后处死，用苏木素-伊红法观察各组小鼠蜕膜组织形态和血管数量；免疫组织化学法和免疫印迹法检测各组小鼠蜕膜组织缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF1α)/血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)/血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2, VEGFR2)蛋白的分布和表达含量。结果 通过网络药理学分析获得当归-白芍药对潜在活性成分27个，对应1 084个靶点。在GeneCards数据库与OMIM数据库中共获得496个RSA相关蛋白靶点以及150个血管生成相关靶点。Venn图得到当归-白芍、RSA、血管生成障碍的交集靶点28个。PPI可视化共同靶点间的相互关系，并得到10个关键基因(hub基因)。28个共同靶点富集于486个基因本体(Gene Ontology, GO)条目(P<0.05)和51条京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)通路(P<0.05)。动物模型验证结果表明，与模型组相比，当归-白芍低、中、高剂量组及黄体酮组能够显著改善蜕膜组织中血管生成，显著提高蜕膜组织中HIF-1α、VEGF和VEGFR2的水平(P<0.01)。结论 当归-白芍药对改善RSA母胎血管生成具有多组分、多靶点和多通路的优势，其中当归-白芍药对可能通过作用于HIF-1α/VEGF/VEGFR2通路基因的表达改善RSA母胎界面的血管生成，达到治疗功效。
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单位宁波市中医院; 浙江中医药大学; 浙江医药高等专科学校
