牛樟芝羊毛甾醇合酶基因AcLSS克隆表达及其对不同环境因子的响应

作者：李甜甜; 范智玉; 梁运祥; 梅余霞^*

来源：食用菌学报, 2021, 28(05): 55-63.

DOI：10.16488/j.cnki.1005-9873.2021.05.007

• 牛樟芝
• 羊毛甾醇合酶
• 酶促反应
• 三萜
• 基因表达

通过转录组测序得到牛樟芝(Antrodia cinnamomea)cDNA序列,用合适的开放阅读框(open reading frame, ORF)进行BLAST得到羊毛甾醇合酶基因AcLSS的蛋白质编码区(sequence coding for amino acids in protein, CDS)序列,根据CDS序列设计引物进行PCR扩增,将AcLSS基因通过T4 DNA连接酶连接到载体pET28a上,通过原核表达得到重组蛋白,采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)法检测体外酶促反应产物,验证其生物活性,并探讨AcLSS基因对不同环境因子的响应。结果表明:在2205 bp处有一条带,与CDS序列大小相符;编码734个氨基酸,相对分子质量大小约为80740,重组蛋白为可溶性蛋白质,能催化2,3-氧化角鲨烯生成羊毛甾醇,具有羊毛甾醇合酶的催化功能;与对照组(麸皮)相比,葡萄糖、蔗糖为碳源时,三萜含量降低,且组间差异均具有统计学意义,基因相对表达量组间差异均无统计学意义;与对照组(酵母提取物)相比,氮源为蛋白胨、硫酸铵时,三萜含量和基因相对表达量均降低,且组间差异均具有统计学意义;与对照组相比,添加金属离子时,三萜含量和基因相对表达量均下降,且组间差异均具有统计学意义;与对照组相比,茉莉酸甲酯、油酸、α-松油醇的添加均导致三萜含量下降,且组间差异均具有统计学意义,而油酸、α-松油醇的添加导致基因相对表达量增加,组间差异均具有统计学意义。

• 单位
  华中农业大学; 生命科学技术学院; 农业微生物学国家重点实验室