小鼠DDX5分子结构特征及功能初步探究

作者：成温玉; 何小兵; 贾怀杰; 景志忠^*

来源：基因组学与应用生物学, 2021, Z1: 1983-1992.

DOI：10.13417/j.gab.040.001983

• DDX5
• 小鼠
• 结构特征
• 基因表达
• 免疫调节

为探讨小鼠DDX5的结构特征及生物学功能,本研究采用RT-PCR技术从小鼠脾淋巴细胞中克隆DDX5基因,通过生物信息学软件分析DDX5的遗传演化关系和结构特征,并运用荧光定量PCR检测小鼠DDX5基因的组织表达谱;进一步将DDX5基因亚克隆至真核表达载体pCMV-Tag2B,通过Western-blot验证表达后,采用双荧光素酶报告系统检测过表达DDX5对NF-κB和IFN-β启动子激活活性的影响。研究结果显示,小鼠DDX5基因开放阅读框全长1 848 bp,编码615个氨基酸,与其它动物的DDX5氨基酸序列同源性非常高(87.7%～98.8%);在小鼠DExD/H解旋酶家族中,DDX5与DDX17遗传距离最近,且与DDX41和DDX3位于同一大支;结构分析显示,DDX5具备典型的DExD核心域和解旋酶C端结构域,但不具备Caspase募集结构域和RIG-I样C端结构;DDX5基因在小鼠心脏表达最高,在外周血淋巴细胞和小肠中表达最低;构建的DDX5真核表达载体能转染HEK293T细胞并成功表达,可显著增强激活NF-κB起始的相对荧光素酶活性,但对IFN-β启动子起始的相对荧光素酶活性无影响。上述结果表明,DDX5可能具有免疫调节的功能,并且参与了NF-κB介导的信号通路,进而为探究鼠源DDX5在病毒感染和免疫学中的作用奠定基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 安康学院; 中国农业科学院兰州兽医研究所