间接竞争时间分辨荧光免疫分析法检测稻米中Cry1C毒素

作者：徐重新; 杨晶祎; 陆梦晓; 仲建峰; 张存政; 张霄; 何鑫; 刘媛; 刘贤金

来源：南京农业大学学报, 2014, 37(06): 44-48.

• Cry1C毒素
• 多克隆抗体
• 稻米
• 时间分辨荧光免疫分析

利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验。结果表明:获得的多克隆抗体质量浓度为3.86 mg·mL-1,效价为1∶48 000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074 ng·mL-1,中抑制浓度(IC50)为60.16 ng·mL-1,线性检测范围(IC20IC80)为0.961 633.60 ng·mL-1;对Cry1B、Cry1Ab和Cry1Ac均有一定的交叉反应;添加回收试验的批内、批间回收率为84.53%107.12%,变异系数为6.05%11.24%。结论:该检测方法稳定性和重复性较好,可以满足Cry1C毒素的检测要求。

• 单位
  江苏省农业科学院; 农业部