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摘要
目的：探讨黄芩素(BAI)对脂多糖(LPS)激活的BV-2细胞条件培养基下SH-SY5Y细胞损伤的干预作用及机制。方法：用LPS 1 mg·L-1激活BV-2细胞建立LPS组条件培养基，同时设置空白组、BAI低、中、高浓度组(4、8、16μmol·L-1)，使用各组条件培养基培养SH-SY5Y细胞。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)试剂盒测定干预后各组BV-2细胞的细胞活力，酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组BV-2细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量；采用免疫组化(IHC)观察SH-SY5Y细胞中α-突触核蛋白(α-syn)、酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达情况，免疫荧光(IF)法观察SH-SY5Y细胞中核转录因子-κB p65蛋白(NF-κB p65，以下简称p65)核转移情况，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SH-SY5Y细胞Toll样受体4(TLR4)、p65、磷酸化(p)-p65、髓样分化因子88(My D88)蛋白表达情况。结果：与空白组比较，LPS组中BV-2细胞活力显著降低(P<0.01)，细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著升高(P<0.01)；与LPS组比较，BAI低、中、高浓度组细胞活力显著升高(P<0.01)，细胞上清液中TNF-α均显著降低(P<0.01),BAI高浓度(16μmol·L-1)组细胞上清液中IL-6含量明显降低(P<0.05),BAI中、高浓度组细胞上清液中IL-1β含量显著降低(P<0.01)。条件培养基处理SH-SY5Y细胞的结果显示，与空白组比较，LPS组SH-SY5Y细胞中p65蛋白表达向核内聚集，TH蛋白表达显著下降(P<0.01),α-syn、TLR4、My D88、p-p65蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01)；与LPS组比较，BAI低、中、高浓度组SH-SY5Y细胞中p65蛋白表达逐渐分散至细胞质中，TH蛋白表达均显著升高(P<0.01),α-syn蛋白表达均显著降低(P<0.01),BAI高浓度组TLR4、My D88、p-p65蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),BAI中浓度组p-p65和My D88蛋白表达均明显降低(P<0.05),BAI低浓度组My D88蛋白表达明显降低(P<0.05)。各组p65蛋白表达差异无统计学意义。结论：BAI能够抑制BV-2细胞激活，从而抑制LPS造成的炎症反应，进而进一步抑制炎症对SH-SY5Y细胞的损伤，其作用机制可能在于调节TLR4/My D88/NF-κB信号通路，减轻炎症反应，发挥神经保护作用。
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单位中国中医科学院医学实验中心; 北京中医药大学东方医院; 中国中医科学院中医临床基础医学研究所
