全反式视黄酸抑制大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化及其机制

作者：舒秀兰; 刘祖银; 毕杨; 陈洁; 刘友学

来源：重庆医科大学学报, 2014, 39(09): 1287-1291.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.000357

• 骨髓间充质干细胞
• 成骨分化
• 全反式视黄酸
• 调控

目的:探索全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,at-RA)对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)成骨分化的影响及其机制。方法:成骨诱导培养基诱导rBMSCs,加入不同浓度(0.1、1.0、5.0μmol/L)at-RA,诱导第7天用组织化学染色法和检测试剂盒检测各组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,第21天用茜素红染色后倒置显微镜观察并经提取法后检测钙盐沉积。于诱导第7、14、21天采用real-time PCR检测骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥素(osteopontin,OPN),在上述时间点的基础上,再增加第1、3天2个时间点检测Runx2、Osterix以及视黄酸受体RARs(α、β)mRNA表达。结果:rBMSCs在成骨培养基诱导下经形态和茜素红染色观察证实能分化为成骨细胞,加入at-RA后培养7 d,ALP活性较对照组增加(F=107.177,P=0.000),与对照组比较,at-RA为1.0、5.0μmol/L 2组明显升高(P<0.05)。然而经茜素红染色测定,ALP升高组其钙盐沉积与对照组比较反而减少(F=57.554,P=0.000)。选at-RA浓度5.0μmol/L做real-time PCR检测,与对照组相比在上述3个时间点OCN(F=211.145,P=0.000)、OPN(F=30.835,P=0.005)表达均降低,Runx2(F=106.536,P=0.000)、Osterix(F=452.546,P=0.000)、RARα(F=253.159,P=0.000)的表达在第21天均下降,除Osterix表现为全程下调外,其他2个基因也在多个时间点有统计学差异;而RARβ表达则全程明显上升(F=2 294.377,P=0.000)。结论:at-RA抑制rBMSCs成骨分化,其机制可能与RARα的下调和RARβ的上调,进而影响Runx2、Osterix的表达有关。

• 单位
  重庆医科大学附属儿童医院