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摘要
目的研究晚期糖基化终末产物(AGE)对长波紫外线(UVA)照射皮肤成纤维细胞组织蛋白酶D(CatD)表达和活性的影响。方法原代培养来自儿童包皮成纤维细胞。CCK-8法筛选对成纤维细胞无细胞毒性的AGE-牛血清白蛋白(BSA)浓度。分别以50、100、200 mg/LAGE-BSA孵育细胞24 h, 以未处理细胞作为对照组, 采用RT-PCR、Western印迹及荧光法检测AGE-BSA对细胞CatD表达和活性影响。将部分成纤维细胞分为6组, 即对照组(正常皮肤成纤维细胞, 不接受任何处理)、AGE-BSA组、BSA组、UVA组、UVA-AGE-BSA组、UVA-BSA组。AGE-BSA组加入最大无细胞毒性浓度AGE-BSA孵育24 h, BSA组加入相同浓度BSA孵育24 h, 后3组除分别接受上述处理外再接受10 J/cm2 UVA照射。处理结束后, 收集细胞mRNA和蛋白, 采用RT-PCR、Western印迹及荧光法检测细胞CatD表达和活性。结果 50、100、200 mg/L AGE-BSA对皮肤成纤维细胞增殖活性无显著影响。50 mg/L组、100 mg/L组、200 mg/L组细胞CatD mRNA水平分别为0.267 ± 0.007、0.348 ± 0.007、0.418 ± 0.006, CatD蛋白水平分别为1.403 ± 0.181、2.233 ± 0.090、2.477 ± 0.111, CatD活性分别为1.760 ± 0.080、2.330 ± 0.060、2.890 ± 0.080, 较相应对照组CatD mRNA(0.161 ± 0.006)、CatD蛋白(0.903 ± 0.200)以及CatD活性水平(1.100 ± 0.090)均显著升高, 均P < 0.05。AGE-BSA呈剂量依赖性地刺激细胞CatD表达和活性。对照组、UVA组和UVA-AGE-BSA组细胞中CatD mRNA表达水平分别为0.155 ± 0.005、0.480 ± 0.005、0.394 ± 0.008, 蛋白表达水平分别为0.920 ± 0.235、2.583 ± 0.199、2.070 ± 0.125, CatD活性分别为1.110 ± 0.040、2.970 ± 0.110、2.560 ± 0.060;UVA组CatD mRNA水平、蛋白表达水平、酶活性均明显高于对照组(P < 0.05), 但UVA-AGE-BSA组3种指标水平均显著低于UVA组(P < 0.05)。结论 AGE可升高未接受UVA照射的皮肤成纤维细胞CatD表达和活性, 但AGE却抑制UVA照射上调的CatD表达和酶活性。
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