铜绿假单胞菌LAMP快速检测方法建立及微滴数字PCR验证

作者：李羽翡; 祖新; 李羽翠; 张德荣^*

来源：食品工业科技, 2020, 41(11): 267-293.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2020.11.041

• 铜绿假单胞菌
• 环介导等温扩增
• 快速检测
• 微滴数字PCR

目的:采用环介导等温扩增技术建立铜绿假单胞菌快速检测方法,并用微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)技术进行方法验证。方法:以铜绿假单胞菌rpod基因为靶基因设计引物,建立了果汁饮品铜绿假单胞菌快速检测方法,对于方法的可靠性、特异性和灵敏度,采用ddPCR验证。结果:本实验建立的LAMP快速检测方法显色结果明显,ddPCR检测,以铜绿假单胞菌悬液浓度为横坐标,以数字PCR扩增copy数为纵坐标,生成标准曲线y=0.07497x-9.3516,线性关系良好,R2=0.9999。铜绿假单胞菌检测范围1.5×102～1.5×105 CFU/mL;方法灵敏度高、特异性强,标准菌株最低浓度为1 ng/μL;标准差分别为0.57、0.71、4.24、14.8,RSD值在0.66%～22.8%之间。检测果汁饮品128份,126份未显色,显色样品2份,以标准曲线定值,浓度分别为1.64×104、2.29×102 CFU/mL。

• 单位
  甘肃省中医院; 甘肃省食品检验研究院; 西北民族大学