B型肉毒毒素单克隆抗体的制备和鉴定

作者：安健; 于海威; 陈洋洋; 刘栋琦; 薛冲; 张惟材; 张秀娟^*; 熊向华^*

来源：军事医学, 2019, 43(12): 930-934.

• B型肉毒毒素
• 抗体,单克隆
• 制备
• 鉴定

目的利用杂交瘤技术筛选抗B型肉毒毒素(BoNT/B)的鼠源单克隆抗体(mAb)。方法以BoNT/BHc蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选阳性细胞株经有限稀释法克隆化后,采用腹水诱生的方法制备抗体,通过亚型鉴定、SDS-PAGE、Western印迹以及非竞争ELISA等方法对抗体进行鉴定。结果5只BALB/c小鼠免疫后尾血效价均达到1∶64 000,取其中效价最高的5号鼠制备杂交瘤,筛选到9株阳性细胞,经鉴定抗体重链有IgG1和IgG2b两种亚型,轻链均为κ型。腹水制备的1E9-H2抗体纯度>96%,以线性表位与抗原BoNT/BHc特异性结合,亲和力常数为6.7×10-9mol/L。结论筛选到1株高亲和力鼠源单克隆抗体,为BoNT/B中和抗体研发及检测方法建立提供了选择。

• 单位
  哈尔滨商业大学