无花果ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者：郭傲; 高欢欢; 陈默; 郑雪莲; 寇燕; 郑国华^*

来源：分子植物育种, 2020, 18(22): 7458-7466.

DOI：10.13271/j.mpb.018.007458

• 无花果(Ficus carica)
• ISSR-PCR
• 反应体系
• 正交试验
• 单因素试验

为建立稳定、可靠的无花果ISSR-PCR体系以及筛选出适用于该体系的ISSR引物,本研究以无花果为研究材料,采用正交设计试验与单因素试验相结合的方法,对影响ISSR-PCR反应的5个因素(Taq聚合酶, dNTPs, DNA模板,引物, Easy Taq Buffer (Mg2+))的工作浓度进行优化。在此基础上,从UBC公布的100条ISSR引物中筛选出16条扩增条带清晰、多态性好的引物,并筛选出其最佳退火温度。试验结果表明,5个因素对无花果ISSR-PCR反应均有极显著影响,影响程度大小依次为:Easy Taq Buffer (Mg2+)>引物>Taq聚合酶>DNA>dNTPs。最终确定的最佳反应体系为:反应总体积25μL,Taq聚合酶1.5 U,dNTPs 0.16 mmol/L,DNA 30 ng,引物0.3μmol/L,Easy Taq Buffer (Mg2+) 3.5μL。研究结果为今后无花果ISSR标记开发、遗传多样性研究等提供了理论依据。

• 单位
  福建农林大学