猪流感病毒血凝素基因原核表达及其在间接ELISA中的初步应用

作者：陈艳; 乔传玲; 丁选亚; 杨焕良; 辛晓光; 韩庆功; 陈化兰

来源：畜牧与兽医, 2008, (11): 10-13.

• 猪流感病毒
• HA基因
• 原核表达 swine influenza virus
• HA gene
• prokaryotic expression

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序。以pMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的免疫学活性,在间接ELISA中的初步应用表明具有良好的抗原反应性。本研究为以重组HA蛋白为抗原...

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 农业部; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所