人HMG盒转录因子1基因shRNA质粒的构建及其功能鉴定

作者：汪军梅; 裴晋红; 黄燕; 栗学清; 张晓伟^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(04): 395-398.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003030

• HMG盒转录因子1基因
• shRNA序列
• 基因重组
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的构建人HMG盒转录因子1(HMG-box transcription factor 1,HBP1)基因shRNA质粒,并探讨该基因的相关功能。方法合成HBP1基因干扰序列,将其插入至慢病毒表达载体pLL3. 7中,构建重组质粒pLL3. 7-shHBP1,经TurboFectTM脂质体介导转染HEK293T细胞,收集含病毒的培养基,分别感染HeLa及HepG2细胞,经puromycin持续筛选,获得稳定转染细胞株。Real-time PCR及Western blot法分别检测HeLa及HepG2细胞中HBP1基因m RNA转录及蛋白表达水平,MTT及流式细胞术分别检测HBP1基因抑制对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。结果经测序鉴定,重组质粒pLL3. 7-shHBP1构建正确。HeLa及HepG2细胞中HBP1基因mRNA转录及蛋白表达水平均明显下调(P <0. 01);HBP1基因抑制后,HeLa细胞的增殖速度明显加快(P <0. 01),细胞凋亡明显减少(P <0. 01)。结论成功构建了HBP1基因shRNA质粒,抑制HBP1表达后可使HeLa细胞的增殖速度加快,细胞凋亡减少。本实验为HBP1基因相关功能的进一步研究奠定了基础。

• 单位
  生物化学教研室; 山西长治医学