靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的嵌合体抗原受体慢病毒载体构建及病毒包装滴定的实验研究

作者：胡想金; 王赛仑; 郭佳; 高耀; 谭炳琴; 闾军^*

来源：北京医学, 2021, 43(09): 905-909.

DOI：10.15932/j.0253-9713.2021.09.016

• 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3
• 嵌合抗原受体
• 免疫治疗
• 原发性肝癌

目的构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3, GPC3)的慢病毒载体,并进行慢病毒载体的鉴定、包装及病毒滴度测定。方法设计靶向GPC3抗原的嵌合性抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)分子重组基因及特异性引物,用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)对CAR分子重组基因进行体外扩增及PCR反应片段搭桥,双酶切后定向插入到pCDH质粒,构建pCDH-anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体,经菌落PCR、DNA凝胶电泳及测序鉴定。将目的质粒与包装质粒共转染293T细胞,收集上清液按不同比例稀释后感染293T细胞,流式细胞术检测anti-GPC3-CAR表达并计算病毒滴度。结果经菌落PCR及测序证实,正确构建重组慢病毒载体pCDH-anti-GPC3-CAR,包装后的病毒滴度为(1.50～3.24)×106TU/ml。结论本研究成功构建携带不同共刺激分子的pCDH-anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体,可在293T细胞中表达并产毒,为后续构建CAR免疫细胞提供技术储备。

• 单位
  首都医科大学附属北京佑安医院