水稻叶绿体基因组定点表达载体的构建及增强型绿色荧光蛋白原核表达分析

作者：谢灵灵; 李丁; 崔玲玲; 严礼; 左佳; 贺荣华; 赵迎曦; 高婧; 曹孟良

来源：杂交水稻, 2011, (05): 60-65.

DOI：10.16267/j.cnki.1005-3956.2011.05.023

• 水稻
• 叶绿体表达载体
• 原核表达
• 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) rice
• chloroplast expression vector
• prokaryotic expression
• enhanced green fluorescent protein(EGFP)

分别克隆了水稻叶绿体基因组同源重组片段trnI和trnA、具有3种不同核糖体结合位点(RBS)序列的增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)、来自烟草叶绿体的16S rRNA基因启动子Prrn和psbA基因终止子TpsbA,将上述元件通过酶切位点依次连接到质粒pUC19上,构建了3种能编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的水稻叶绿体基因组定点整合表达载体pIA-EGFP1、pIA-EGFP2和pIA-EGFP3。进行分子检测验证后,对上述载体进行了大肠杆菌EGFP原核表达检测,结果携带来源于λ噬菌体T7基因10的5'端非翻译区的载体pIA-EGFP3荧光最强,适合用于水稻叶绿体转化。

• 单位
  基因科技有限公司; 国家杂交水稻工程技术研究中心; 中南大学; 杂交水稻国家重点实验室