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摘要
目的研究Ⅱ型重组腺相关病毒(recombinantadeno-associated virus 2,rAAV2)载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)对体外培养兔晶状体上皮细胞的转染和表达情况,为rAAV携带目的基因防治后囊膜混浊提供理论依据。方法组织块培养法体外培养兔晶状体上皮细胞。rAAV2-EGFP按感染复数(multiplic-ity of infection,MOI)为103、104、105、4×105、106转染传2代细胞,转染后第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天在倒置荧光显微镜下观察晶状体上皮细胞中EGFP表达的阳性情况,记录200个细胞中EGFP阳性表达所占的百分比。当EGFP表达稳定后用激光共聚焦显微镜照相。用倒置显微镜观察rAAV转染对细胞生长和形态的影响。结果当MOI=103、104时,转染后第72小时晶状体上皮细胞中EGFP开始表达,当MOI=105、4×105、106时,转染后第24小时便可见EGFP阳性表达。随着MOI值的增大及时间的延长,EGFP表达效率逐渐增高,转染后第8~第9天达到高峰并维持,此时,MOI=103、104、105、4×105、106的转导效率分别为16%、41%、55%、86%、94%。对照组和转染组细胞的生长和形态特征无明显改变。结论腺相关病毒载体可以携带报告基因稳定转染晶状体上皮细胞,并且转染效率高,因而腺相关病毒携带目的基因防治后囊膜混浊是可行的。
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