新疆野生欧洲李ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者：经建永; 陈曦; 马百强; 耿文娟^*

来源：分子植物育种, 2021, 19(04): 1223-1231.

DOI：10.13271/j.mpb.019.001223

• 野生欧洲李
• ISSR-PCR
• 正交试验
• 单因素试验
• 体系优化

为建立适合新疆野生欧洲李的ISSR-PCR反应体系,本研究以野生欧洲李为供试材料,采用L16(45)正交试验设计和单因素试验设计相结合的方法,对影响野生欧洲李ISSR-PCR反应体系的5个因素(DNA模板, Taq酶, d NTPs,引物, Mg2+)进行筛选与优化,对16条引物的退火温度进行筛选。结果表明,Taq酶对PCR扩增反应的影响最大,野生欧洲李ISSR-PCR最佳反应体系为:总体积20μL,5 U Taq酶0.10μL,10 mmol/L引物1.00μL,2.5 mmol/L dNTPs 1.50μL,10×Buffer (含Mg2+) 2.00μL,50 ng/μL DNA模板1.00μL,双蒸水14.40μL。建立的ISSR-PCR反应体系经过22份野生欧洲李样品验证,表明反应体系稳定可靠,可用于后续遗传多样性研究,为野生欧洲李种质资源的保护和利用提供理论参考。

• 单位
  新疆农业大学