泛素特异肽酶22基因通过Myc调控人膀胱癌EJ细胞增殖的机制研究

作者：吕磊; 章传华; 袁敬东; 汪良; 蒋国松; 曾甫清

来源：中华泌尿外科杂志, 2014, 35(02): 129-133.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1000-6702.2014.02.013

• 泛素特异肽酶22
• Myc基因
• 转录因子Sp1
• 转录调控
• 膀胱癌

目的研究非对称小干扰RNA(asymmetric structure of interfering RNA,aiRNA)沉默泛素特异肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)基因对膀胱癌EJ细胞增殖的影响及其相关机制。方法 2010年8月至2012年3月,我们设计并合成USP22 aiRNA及阴性对照aiRNA(NCaiRNA)。USP22 aiRNA序列结构包括长度分别为15 bp和21 bp的正义链和反义链,将此aiRNA命名为USP22 aiRNA(15/21),利用脂质体转染膀胱癌EJ细胞。实验分3组:对照组、NC-aiRNA组和USP22 aiRNA(15/21)组。转染后48 h,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法分别检测USP22、Myc、cyclin D1和cyclin E1基因mRNA和蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测EJ细胞的增殖活性,荧光素酶报告基因检测系统检测Myc启动子活性。利用染色质免疫共沉淀法(chromatin immunoprecipitation,ChIP)分析沉默USP22基因后转录因子Spl与Myc基因启动子的结合情况。结果与对照组相比,转染USP22 aiRNA(15/21)48 h后EJ细胞中的USP22、Myc、cyclin D1和cyclin E1的mRNA和蛋白表达水平分别下调了(87.44-5.2)%和(91.2±7.3)%、(69.2±4.3)%和(61.0±6.6)%、(78.5±4.1)和(67.4±5.5)%、(81.0±5.5)%和(78.3±4.0)%(P<0.05)。MTT结果显示,USP22aiRNA(15/21)组EJ细胞的增殖活性明显受到抑制,在24、48、72和96 h 4个时间点的细胞生长活性分别为(85.4+5.7)%、(71.3±8.4)%、(52.5±6.7)%和(45.8±6.4)%(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测结果显示,USP22 aiRNA(15/21)组Myc启动子的转录活性下调(65.5±4.2)%(P<0.05)。ChIP结果进一步显示,沉默USP22抑制了转录因子Sp1与Myc启动子的结合,USP22 aiRNA(15/21)组Sp1与Myc启动子的结合能力相比对照组下调了(48.0±3.2)%(P<0.05)。结论USP22 aiRNA(15/21)可能通过抑制Myc基因启动子与转录因子Sp1的结合,下调Myc的表达,从而抑制膀胱癌EJ细胞的增殖。

• 单位
  华中科技大学; 协和医院; 武汉市第一医院