分析单克隆抗体电荷异质性的成像毛细管等电聚焦电泳技术平台方法的建立

作者：杨波; 邢振荣; 武明扬; 程一琳; 韩莉; 杨巧娣; 张银川^*; Guo Amy^*

来源：国际生物制品学杂志, 2018, 41(05).

• 电泳,毛细管
• 等电聚焦
• 抗体,单克隆
• 实验室技术和方法
• 电荷异质性

目的采用成像毛细管等电聚焦电泳技术(imaged capillary isoelectric focusing,iCIEF)建立分析单克隆抗体(单抗)电荷异质性的平台方法 ,并用不同亚型单抗(IgG1、IgG2、IgG4)确认该平台方法的适用性。方法优化该平台方法的部分参数,包括两性电解质和阴极稳定剂体积、聚焦时间和尿素浓度。采用3种亚型单抗(IgG1、IgG2、IgG4)对该平台方法的专属性、精密度、线性、准确度和耐用性进行验证。结果对样品(单抗)的处理条件为:3mol/L尿素-0.5%甲基纤维素溶液70μl、两性电解质(pH3～10) 4μl、阴极稳定剂(500 mmol/L精氨酸)2μl、等电点6. 14和9. 99 Marker各2μl,最终完成0. 2 mg/ml单抗(样品)的制备。检测参数:预聚焦1 500 V、1 min,聚焦3 000 V、8 min。该平台方法的专属性良好,制剂缓冲液对检测无干扰。重复检测6份平行样品以及不同分析员于不同时间检测12份样品各成分含量的相对标准偏差均符合规定的要求。单抗(样品)终浓度为0. 1～0.3 mg/ml时,主要和酸性成分的线性决定系数(R2)≥0. 99,碱性成分的线性R2≥0. 98。该平台方法检测样品各成分的准确度为92%～105%。耐用性实验设计结果表明,两性电解质(pH3～10)体积和毛细管批次对该平台方法有显著影响。结论建立的iCIEF平台方法分离度较高,精密度、准确度和耐用性良好,为单抗制品的电荷异质性表征和质量控制提供了更有效的工具。