摘要
目的探讨miR-494负调控ROCK1、PTEN进而抑制胰腺细胞凋亡并参与急性胰腺炎发生发展的机制研究。方法雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞, ELISA法检测细胞培养上清液中淀粉酶、TNF-α、IL-1、IL-6水平以验证急性胰腺炎细胞模型。RT-PCR检测正常AR42J细胞(对照组)、急性胰腺炎细胞模型(模型组)中的miR-494表达水平。流式细胞法检测对照组、转染阴性对照miRNA的急性胰腺炎细胞模型(阴性对照组)以及转染miR-494的急性胰腺炎细胞模型(miR-494转染组)的细胞凋亡情况。Western Blot检测对照组、阴性对照组以及miR-494转染组中促凋亡蛋白ROCK1、PTEN的表达情况。结果雨蛙素处理AR42J细胞8 h、12 h时的细胞培养上清液中的淀粉酶、TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著高于0 h及对照组, 差异均有统计学意义(P<0.05), 提示模型构建成功。急性胰腺炎细胞模型构建后8 h、12 h、24 h的miR-494表达水平均显著高于4 h时及对照组, 差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组的细胞凋亡比例显著高于对照组, miR-494转染组的细胞凋亡比例显著低于模型组, 差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-494转染组ROCK1、PTEN蛋白的表达水平均显著低于模型组和阴性对照组, 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论急性胰腺炎发生时过表达的miR-494能够抑制促凋亡蛋白表达, 从而抑制胰腺腺泡细胞凋亡并促进急性胰腺炎发生发展。
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