三种Bcl-2家族蛋白的表达、纯化及活性分析

作者：朱翠侠; 李勋; 李雯雯; 石志敏; 周佳海; 王任小

来源：生物医学工程学杂志, 2010, (04): 834-841.

• Bcl-2家族蛋白
• 表达
• 纯化
• 荧光偏振
• 体外筛选 Bcl-2 family proteins
• Expression
• Purification
• Fluorescence polarization
• In vitro screening

Bcl-2家族蛋白(Bcl-xL、Bcl-2、Mcl-1等)是细胞凋亡、自吞噬等生命过程的重要调控因子,是近年来热门的抗肿瘤药物靶标。从文献报道的蛋白序列出发,克隆用于表达Bcl-2蛋白的人源Bcl-2/Bcl-xL嵌合基因以及用于表达Mcl-1蛋白的人源与鼠源Mcl-1嵌合基因,分别构建谷胱甘肽巯基转移酶(GST)和组氨酸标签融合基因的原核表达质粒,建立这些融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达及纯化方法,以及GST融合的Bcl-xL蛋白的表达纯化方法。通过基于荧光偏振原理的实验方法,测定表达纯化得到的目标蛋白与Bid BH3多肽的结合常数,所得结果与文献报道值接近,而且带有GST标签的融合蛋白与无...

• 单位
  生命有机化学国家重点实验室; 中国科学院上海有机化学研究所